鸡传染性支气管炎多表位基因疫苗的构建及其免疫效果评价

摘要

旨在构建一种安全、有效的鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）S1蛋白的多表位疫苗,并评价其免疫效果。本研究通过多种在线生物预测软件分别筛选出IBV M41、T、QX及H120毒株S1蛋白的同源与非同源优势表位,用连接肽将所筛选的B细胞、T细胞表位进行连接,构建出1条具有高免疫原性的新肽段W。通过T2A将W与4种毒株S1蛋白的截短序列连接,构建重组真核表达质粒pEGFP-WMQtH、pEGFP-W和pEGFPMQtH,经PCR和双酶切鉴定后转染至HEK293A细胞,用Western blot检测目的蛋白的表达情况。将构建好的质粒肌肉注射雏鸡2次,检测免疫后雏鸡抗体水平、细胞因子水平及外周血T淋巴细胞亚群。设计和筛选的表位蛋白W结构稳定,具有抗原性和可溶性;重组质粒pEGFP-WMQtH、pEGFP-W和pEGFP-MQtH的目的基因核苷酸序列与预期相符,能在真核细胞中表达出目的蛋白,且无明显细胞毒性;首免后14和35 d,与对照组相比,pEGFP-W免疫组鸡血清中抗IBV IgG抗体水平极显著升高（P<0.05）;血清中细胞因子IL-2和IFN-γ水平显著升高（P<0.05）;外周血CD4⁺T淋巴细胞占比和CD4⁺/CD8a值均显著升高（P <0.0 5）;各组之间脏器组织均未见明显病理损伤。本研究成功构建了基于IBV S1基因的新型多表位基因疫苗,能激发鸡的体液免疫和细胞免疫反应,为后续研制同时预防不同IBV毒株感染的新型疫苗奠定了基础。

关键词

鸡传染性支气管炎 / 多表位基因疫苗 / S1蛋白 / 免疫效果