牛呼吸道合胞体病毒重组G蛋白间接ELISA方法的建立

摘要

为建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)血清学检测方法,本研究对BRSV的G、F、P、M 4种蛋白进行原核表达,筛选最适包被抗原建立间接ELISA检测方法。结果显示,成功表达BRSV的4种重组蛋白rG、rF、rP、rM;棋盘法筛选结果显示,rG蛋白P/N值最大,确定为间接ELISA方法建立的最佳包被抗原;建立的间接ELISA最佳反应条件为:rG蛋白包被质量浓度为1 mg/L,37℃2 h;3%BSA37℃封闭1 h;血清1:50稀释,37℃孵育1 h;二抗1:5 000稀释,37℃30 min;底物显色条件为37℃15 min;选取30份阴性血清,利用所建立的间接ELISA方法确定临界值为0.6 3。特异性试验结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法仅识别BRSV阳性血清,与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)阳性血清均不发生反应。重复性试验结果表明本方法具有良好的重复性,其批内、批间变异系数均小于10%。敏感性试验结果表明,BRSV阳性血清稀释至1:8 192时结果仍为阳性。使用本试验建立的间接ELISA方法与进口试剂盒同时对100份临床血清样本进行检测,两者总符合率达到90.48%,阳性符合率为93.42%,阴性符合率为82.75%。本试验所建立的间接ELISA可用于临床BRSV的检测。

关键词

牛呼吸道合胞体病毒 / rG蛋白 / 间接ELISA