金黄色葡萄球菌凝集因子ClfB基因缺失株的构建及生物学特性分析

摘要

探究金黄色葡萄球菌中凝集因子B（clfB）基因的生物学功能。构建重组质粒pBT2-△clfB并转化至金黄色葡萄球菌J5 7中,采用同源重组技术构建clfB基因缺失株△clfB,构建表达质粒pLI50-clfB,修饰后转化至基因缺失株△clfB,构建回补株（C△clfB）。将J57、△clfB和C△clfB分别在37℃培养不同时间测定D₆₀₀值,绘制各菌株的生长曲线;采用接触法分析各菌株的溶血特性;并测定各菌株在TSA平板上的运动性以及在TritonX-100作用下的自溶率;采用结晶紫染色法检测各菌株的生物被膜形成能力,并对各菌株形成的生物被膜组分进行定量分析;采用K-B法测定各菌株对常用抗生素的敏感性。成功构建出clfB基因缺失株△clfB和回补株C△clfB,缺失株与野生株和回补株的生长曲线基本一致;与J57和C△clfB相比,△clfB的溶血能力下降,运动性能降低;在TritonX-100作用下,△clfB的自溶率显著降低（P<0.01）;△clfB形成生物被膜的能力显著降低（P<0.05）,生物被膜中胞外DNA和蛋白质含量显著下降（P<0.05）,可溶性多糖含量显著升高（P<0.05）;△clfB对氯霉素、庆大霉素和卡那霉素3种抗生素的敏感性增强,对利奈唑胺的敏感性降低。clfB基因与金黄色葡萄球菌的自溶、溶血能力、运动性及生物被膜形成能力密切相关,影响细菌对部分抗生素的敏感性。

关键词

金黄色葡萄球菌 / clfB基因 / 基因缺失 / 生物学特性