奶牛乳腺上皮细胞内金黄色葡萄球菌快速检测方法的建立

摘要

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）可入侵到奶牛乳腺上皮细胞内,逃避宿主免疫,引起长期或反复感染。明确奶牛乳腺是否发生了S.aureus胞内感染对建立科学的乳房炎治疗策略具有重要意义,但目前缺乏胞内S.aureus的快速检测方法。本研究旨在建立一种高效、便捷、经济的S.aureus胞内感染的检测方法。首先用100μL浓度为8.5×10¹⁰ CFU/mL的S.aureus与生长密度为80%的奶牛乳腺上皮细胞系共培养2 h,并用100μL溶葡萄球菌酶孵育,清除胞外的S.aureus,再通过透射电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察,确定S.aureus是否入胞,以此构建体外胞内感染模型;将上述胞内感染S.aureus的细胞与0.5%的TritonX-100共孵育15 min后进行革兰染色,并用油镜检测。结果显示,透射电子显微镜和激光共聚焦显微镜均可观察到牛乳腺上皮细胞中存在S.aureus,自建立检测法“穿孔素-革兰染色法”也可在不使用昂贵仪器设备的情况下准确快速观察到胞内S.aureus。之后使用梯度离心法提取70头S阳性乳房炎患牛乳汁中的体细胞,使用“穿孔素-革兰染色法”检测乳腺上皮细胞内S.aureus感染率,结果表明82.9%的患牛发生了胞内感染,为临床上采用更科学方法进行治疗提供了依据。

关键词

奶牛乳房炎 / 金黄色葡萄球菌 / 胞内感染 / 溶葡萄球菌酶 / 快速检测