羊源奇异变形杆菌分离鉴定及灭活疫苗免疫效果评价

摘要

为探究羊源奇异变形杆菌(Proteus mirabilis,PM)致病性及其灭活疫苗的免疫效果,对伴有严重腹泻症状的病死绵羊进行剖检,采集肝脏、脾脏等病变器官,通过形态观察,革兰染色镜检、生化试验、分子生物学及16S rRNA测序方法对分离菌株进行鉴定;通过药敏试验、小鼠致病性试验及病理组织学观察研究其耐药性及致病性;分离菌株经甲醛灭活后与含有氢氧化铝的明矾佐剂混合制备灭活疫苗;经安全性检测后免疫小鼠,进行抗体、细胞因子检测和免疫效果评价。结果显示分离菌株经纯化染色后呈现两端钝圆的革兰阴性短杆菌,结合生化试验、PCR扩增片段及16S rRNA测序结果表明该菌株为PM;药敏试验结果表明分离菌株对阿米卡星、哌拉西林等4种抗生素高度敏感(S),其余表现为中度或低度敏感,甚至表现为耐药;分离菌株对小鼠致死浓度为1.6×10～5 CFU/mL,且能够造成肝脏、脾脏等主要脏器不同程度充血淤血及炎性细胞浸润;甲醛灭活疫苗不会造成小鼠产生不良反应,免疫小鼠血清中IgG、IgG1及IgG2a抗体水平和IL-4、IFN-γ显著高于PBS组,在攻菌试验中疫苗免疫保护率为90%。本试验成功从病死绵羊脏器内分离得到PM。采用甲醛灭活法制备的PM灭活疫苗能够介导体液免疫对PM感染起到预防作用,可为绵羊养殖过程中PM病的预防提供新方法。

关键词

绵羊 / 奇异变形杆菌 / 灭活疫苗 / 免疫保护