田基黄复方通过减轻炎症促进自噬缓解肝损伤的作用及机制

摘要

基于网络药理学,通过分子对接与试验验证,探究田基黄复方（HRS）在肝损伤治疗中的作用机制。将小鼠随机分为空白组（CON组）、模型组（CCL₄组）、药物高剂量组（HRS-H组）与低剂量组（HRS-L组）,利用CCL₄诱导建立小鼠肝损伤模型,观察肝组织病理形态,测定肝脏炎症因子基因相对表达量。通过Herb、TCMSP、PuChem、Swiss Target Prediction、Gene Cards、DisGeNET等数据库获得中药活性成分及中药和疾病靶点信息,通过靶点取交集获得药物潜在作用靶点,使用string数据库对潜在靶点进行蛋白质相互作用（PPI）分析,进一步利用Cytoscape构建“药物—活性成分—交集靶点”网络图,使用David数据库对潜在靶点进行GO、KEGG分析。使用Auto Dock Tools软件进行分子对接,最后对分子对接结果进行试验验证,检测关键靶点及其下游基因,PI3K-AKT通路以及细胞自噬通路相关基因的表达情况。动物试验结果显示,与CON组相比,CCL₄组小鼠肝索紊乱,肝细胞发生脂肪变性、空泡变性,并出现大量炎性细胞浸润现象,而药物治疗组均能够改善CCL₄引起的肝损伤,且HRS-H组效果优于HRS-L组。小鼠肝脏RT-qPCR结果显示,相比于CON组,CCL₄组小鼠TNF-α,INOS的mRNA相对表达量极显著升高（P<0.01）,IL-1β的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。而相比于CCL₄组,HRS-H组TNF-α,INOS和IL-1β的mRNA相对表达量均极显著降低（P<0.01）。通过网络药理学筛选出HRS缓解肝损伤的潜在靶点155个,根据degree值,筛选出排名靠前的关键靶点为STAT3,SRC,PIK3R1,PIK3CA,AKT1,HSP90A11,EGFR与ESR1;主要成分为四甲氧基木犀草素、高车前素、泽兰叶黄素、山奈酚以及台湾泽兰素。GO功能富集分析到940个条目,KEGG富集分析到177条生物通路。分子对接结果显示,HRS的主要成分与关键靶点之间的结合能力较强。RT-qPCR结果显示,与CON组相比,CCL₄组EGFR、PI3KCA、HSP90A11、NF-κB的mRNA相对表达量均呈现上升趋势,AKT1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,ULK1、ATG5、LC3B、ATG7 mRNA相对表达量显著降低（P<0.05）,PTEN、ATG13、BECLIN-1、ATG16L1、ATG12、ATG4B、ATG3 mRNA相对表达量极显著下降（P<0.01）。而与CCL₄组相比,HRS-H组PI3KCA、HSP90A11、NF-κB的mRNA对表达量显著降低（P<0.05）,EGFR、AKT1、mTOR的mRNA相对表达量极显著降低（P<0.01）,ULK1相对表达量呈现上升趋势,PTEN,ATG16L1,ATG5,LC3B,ATG7 mRNA相对表达量显著上升（P<0.05）,ATG13、BECLIN-1、ATG12、ATG4B、ATG3 mRNA相对表达量极显著上升（P<0.01）结论:HRS通过多成分多途径发挥保肝作用,其中调控PI3K-AKT通路减轻炎症,促进肝细胞自噬可能是其发挥保护作用的重要途径之一。

关键词

田基黄复方 / 网络药理学 / 肝损伤 / 自噬