过表达APN稳转BHK-21细胞系的构建及其对冠状病毒的易感性

摘要

通过构建过表达人、猪、犬、猫4个物种氨肽酶N(APN)的仓鼠肾成纤维细胞系(BHK-21)稳转细胞系，并初步评估这些细胞系对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的易感性，建立探究受体为APN的不同冠状病毒跨物种传播风险的通用方法。通过PCR扩增实验室保存的4种动物pEGFP-C1-APN(人、猪、犬、猫)质粒的APN目的序列，将其序列加入Flag标签后，通过同源重组连接克隆至pcDNA4.0载体。将测序验证的重组质粒转染BHK-21细胞，经Zeocin筛选及两轮有限稀释法，获得稳定表达不同物种APN的BHK-21细胞系。通过间接免疫荧光试验鉴定构建的BHK-21细胞系，并检测这4种细胞系对PDCoV和TGEV的易感情况。结果显示，成功构建人、猪、犬、猫4个物种BHK-21-APN稳转细胞系。病毒感染试验结果显示，PDCoV可通过人、猪、犬APN侵染细胞，而猫APN不介导PDCoV入侵细胞；TGEV可通过猪、犬、猫APN侵染细胞，而人APN不介导TGEV入侵细胞。结果表明，构建表达不同物种APN的稳转细胞系可用于评估不同冠状病毒的跨种感染风险；揭示了PDCoV具有跨种感染人和犬、TGEV具有跨种感染犬和猫的潜在风险，并为未来建立更为全面的不同动物APN稳转细胞系以评估这2种病毒的潜在宿主谱及冠状病毒“人病兽防”防控策略提供依据。

关键词

氨肽酶N(APN) / BHK-21细胞系 / 跨物种传播 / 猪δ冠状病毒 / 传染性胃肠炎冠状病毒