猪圆环病毒2d基因型ORF2基因重组猪伪狂犬病病毒的免疫原性

焦显芹; 王涛; 田润博; 马世杰; 闫志浩; 陈红英

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.10.04

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (10) : 2118 -2125. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.10.04

猪圆环病毒2d基因型ORF2基因重组猪伪狂犬病病毒的免疫原性

焦显芹, 王涛, 田润博, 马世杰, 闫志浩, 陈红英

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摘要

为研发同时预防和控制猪圆环病毒2d基因型（PCV2d）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的疫苗，将PCV2d ORF2基因克隆到含有绿色荧光蛋白（EGFP）基因的PRV转移质粒pG中BamHⅠ位点，获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将其与PRV变异株3基因缺失毒株gE^-/g^-/TK^-PRV NY DNA转入ST细胞中，经绿色荧光蚀斑纯化，得到表达EGFP的重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。采用CRISPR/Cas9基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因，经蚀斑纯化，拯救出不表达EGFP的重组病毒rPRV-PCV2d。重组病毒rPRV-PCV2d与亲本株gE^-/g^-/TK^-PRV NY具有相近的遗传稳定性，且能够表达PCV2d衣壳（Cap）蛋白。在6周龄小鼠免疫试验中，与商品化PCV2灭活疫苗相比，rPRV-PCV2d刺激小鼠机体诱导了更高的PCV2特异性抗体，且用PCV2d强毒株攻毒后，rPRV-PCV2d显著降低了小鼠心脏、肝脏、脾脏等组织中PCV2d载量。此外，rPRV-PCV2d在小鼠体内激发PRV特异性免疫应答，并能阻止PRV强毒对小鼠的侵袭。表明rPRV-PCV2d具有良好的免疫原性。