重组长效猫IFNω-FSA融合蛋白表达与生物活性

摘要

设计合成长效猫ω干扰素融合蛋白并验证其生物功能。根据NCBI猫血清白蛋白及猫ω干扰素序列优化，并构建重组质粒pET-30a（+）-FSA-FeIFNω,将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导重组蛋白FSA-FeIFNω表达，对表达的包涵体蛋白进行Western blot鉴定，Ni-NTA亲和层析法对复性产物进行纯化，BCA法对纯化后透析、浓缩蛋白浓度进行测定，微量细胞病变抑制法在CRFK/VSV系统下对重组蛋白抗病毒活性进行检测，50%小鼠血浆法检测其体外半衰期，MTT法检测肿瘤细胞增殖抑制活性，小鼠黑色素瘤模型检测抗肿瘤活性。结果显示，成功构建pET-30a（+）-FeIFNω和pET-30a（+）-FSA-FeIFNω表达载体，并在大肠杆菌中获得87 kDa重组FSA-FeIFNω蛋白，纯化后蛋白纯度可达95%,质量浓度为1 g/L,融合表达干扰素生物学活性为2.56×10～6 IU/mg,血浆半衰期明显延长（>24 h）,对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10半数抑制浓度(IC₅₀)为56.01 mg/L。FSA-FeIFNω组明显抑制肿瘤生长，治疗效果优于对照组及其他试验组。本研究所获得的重组FSA-FeIFNω蛋白具有长效作用且具有较好的生物活性。

关键词

猫血清白蛋白 / 猫ω干扰素 / 融合表达 / 生物活性 / 半衰期