基于铁蛋白的GnRH纳米颗粒对雄性BALB/c小鼠的免疫去势

摘要

旨在研究新型免疫去势疫苗，设计并合成重组质粒pET-30a-SF,表达重组蛋白SF,与合成多肽STGP体外偶联制备SF-STPG纳米颗粒疫苗，研究其对小鼠的免疫去势效果。将Spy Catcher与ferritin氨基酸序列通过GGGGS连接，经大肠杆菌密码子优化后构建重组质粒pET-30a-SF,转化至大肠杆菌中进行诱导表达。通过Ni柱亲和层析对重组蛋白SF进行纯化，并对其进行表征。多肽STGP由Spy Tag、GnRH、PADRE经GGGS连接，将重组蛋白SF与多肽STGP进行体外偶联，通过透射电子显微镜（TEM）、动态光散射（DLS）观察自组装纳米颗粒。将制备的SF-STGP纳米颗粒与MONTANIDE ISA 206 VG以1∶1混合制备成疫苗，对雄性BALB/c小鼠进行皮下注射免疫并对其进行免疫去势评价。结果显示，重组蛋白SF在18℃、0.25 mmol/L IPTG诱导14 h可溶性表达最高，与STGP在1∶8摩尔比有最大偶联效率。经TEM、DLS分析，重组蛋白SF和SF-STGP均可以自组装形成平均直径分别为16.2、17.8 nm的纳米颗粒。对小鼠免疫结果显示，SF-STGP纳米颗粒疫苗在首免后产生特异性GnRH抗体，在第10周特异性抗体D₄₅₀达到峰值，其中SF-STGP+ISA 206免疫组特异性抗体D₄₅₀峰值为2.8,各免疫组特异性抗体水平均显著高于对照组（P<0.05）。此外，SF-STGP纳米颗粒疫苗有效的降低了小鼠血清中的睾酮浓度，免疫组睾酮浓度显著低于对照组（P<0.05）,与对照组小鼠相比，免疫组小鼠表现出睾丸萎缩现象。构建的SF-STGP纳米颗粒疫苗是一种高效的免疫原，可导致睾丸萎缩并降低性腺激素浓度，具有良好的去势效果，为哺乳动物免疫去势疫苗提供了新的思路。

关键词

GnRH / 免疫去势 / ferritin / Spy Catcher-Spy Tag / 纳米颗粒 / 小鼠