猪流行性腹泻病毒RBD蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

喻蓓蕾; 邹亚文; 何庆; 李丹彤; 蒋一凡; 王智勇; 袁倩; 杨毅; 王乃东

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.11.03

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (11) : 2318 -2324. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.11.03

猪流行性腹泻病毒RBD蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

喻蓓蕾, 邹亚文, 何庆, 李丹彤, 蒋一凡, 王智勇, 袁倩, 杨毅, 王乃东

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

PDF

摘要

猪流行性腹泻病毒(PEDV)表面刺突蛋白(spike protein, S)的受体结合区(RBD)是介导病毒入侵宿主细胞的关键结构域，也是诱导机体产生中和抗体的关键靶点。为制备可用于PEDV RBD生物学功能研究及新型诊治方法开发的抗体，本研究以Sf9昆虫细胞表达的重组RBD蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株，并对单抗进行反应活性鉴定。ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)结果表明，筛选得到的3株单克隆抗体(3E5、4F9和5A5)与病毒和RBD蛋白具有良好的反应性。抗体亚型鉴定结果表明，单抗3E5和4F9为IgG1型，单抗5A5为IgM型。体外中和试验进一步发现，单抗3E5具有病毒中和活性。本研究成功制备了3株PEDV RBD蛋白的单克隆抗体，为RBD蛋白的生物学功能研究、PEDV血清学检测和疫苗研制提供新的抗体工具。