牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

摘要

本研究旨在制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）高亲和性单克隆抗体（mAb）,并建立一种双抗体夹心ELISA检测方法。采用差速超速离心法浓缩纯化病毒，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞，有限稀释法进行亚克隆，通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株。应用制备的单抗4D11作为捕获抗体，HRP标记的单抗3F3作为检测抗体，建立检测BVDV的双抗体夹心ELISA方法。ELISA叠加试验和单克隆抗体可变区基因序列测定结果表明，2株单抗识别不同的抗原表位。特异性试验表明，2株单抗均能特异性识别BVDV,而不与其他牛腹泻病毒发生交叉反应。间接免疫荧光试验和Western blot试验结果显示，单抗与病毒具有良好的反应性。本研究建立的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性；敏感性试验显示，该方法最低可检测3.1×10～4 TCID₅₀的病毒量；重复性试验表明，批间变异系数为2.47%～7.44%,批内变异系数为1.71%～9.89%,显示重复性良好。该方法的建立可为BVDV快速诊断及防控提供有效的技术手段。

关键词

牛病毒性腹泻病毒 / 单克隆抗体 / 双抗体夹心ELISA