猪鼻支原体和猪肺炎支原体双重LFD-RPA快速检测方法的建立

贾琪; 王丽; 王寒竹; 宋晶晶; 孙婧; 李辉; 李峰; 韩开顺; 冯志新; 李书光

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.11.11

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (11) : 2380 -2386. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.11.11

猪鼻支原体和猪肺炎支原体双重LFD-RPA快速检测方法的建立

贾琪, 王丽, 王寒竹, 宋晶晶, 孙婧, 李辉, 李峰, 韩开顺, 冯志新, 李书光

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摘要

为建立一种可同时检测猪鼻支原体(Mhr)和猪肺炎支原体(Mhp)的操作简单、特异灵敏且适用于现场快速检测的诊断方法，以Mhr p37和Mhp p36基因序列为靶基因设计特异性引物和探针，通过筛选引物和探针、优化引物配比，建立双重LFD-RPA快速检测方法，并通过灵敏度、特异性、重复性和临床样本检测试验评价其检测效果。结果显示，建立的双重LFD-RPA检测方法在39℃下反应15 min即可完成扩增，其最佳引物配比为1.6∶0.8,最低检出限分别可达3.63、3.60拷贝/μL;重复性稳定；与巴氏杆菌、波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、大肠杆菌之间无交叉反应。本试验成功建立了一种双重LFD-RPA检测方法，该方法可同时检测Mhr和Mhp,且操作简单、特异灵敏，无需依赖专业设备，适用于开展Mhr和Mhp的现场快速诊断。