绵羊HSF1生物信息学分析、多克隆抗体制备及免疫组化分析

摘要

热休克因子1(HSF1)是细胞应激反应和蛋白质稳态维持中的核心转录因子，广泛参与细胞生长、分化、代谢等生物学过程。本研究旨在通过生物信息学分析和免疫学等技术，设计绵羊HSF1蛋白抗原肽并制备多克隆抗体，并验证其在绵羊肺和睾丸组织中的应用效果。首先，通过生物信息学手段对绵羊HSF1基因进行了序列、结构及进化分析，预测了关键的抗原表位。然后，选择适合的多肽片段进行合成，加入弗氏完全佐剂或不完全佐剂佐剂乳化并免疫新西兰兔。通过间接ELISA、Western blot以及免疫组化(IHC)试验验证该抗体的特异性与有效性。结果显示，HSF1蛋白长度564 aa,相对分子质量60.76 kDa,理论等电点pI为5.32,具有亲水性，不稳定。系统发育树结果表明HSF1在牛科多数成员以及人、小鼠、大鼠等物种中高度保守，但存在局部位点的差异，其中绵羊HSF1与山羊亲缘关系最近，其次是加拿大盘羊和鬣羚。绵羊HSF1磷酸化位点总体趋向于中间及C端密集分布，与人HSF1预测结果整体基本一致，局部的分布存在一定差异。制备的多克隆抗体在识别绵羊HSF1蛋白方面效价超过1∶8 000,Western blot试验验证条带清晰，分子量大小相符，表明获得的多克隆抗体具有良好的特异性；且在绵羊肺组织和睾丸组织中能够检测到HSF1的表达与特异性分布。此研究成功制备基于绵羊HSF1抗原肽的HSF1多克隆抗体，首次检测了盘羊杂交羊睾丸和肺组织HSF1免疫组化分布，为进一步探讨HSF1在盘羊杂交羊机体中的生理作用和在应激反应、疾病防治中的潜在应用提供了重要工具。

关键词

绵羊 / 热休克因子1 / 多克隆抗体 / 生物信息学 / 免疫组化