伪狂犬病病毒UL14蛋白单克隆抗体制备及亚细胞定位

摘要

伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV）间质蛋白UL14是病毒复制和毒力侵袭的重要组成部分，可协同病毒其他蛋白完成对宿主的侵染，是潜在的重要抗病毒靶点之一。本研究以实验室所分离的PRV DX株为亲本株，通过原核表达系统表达并纯化重组UL14蛋白，并以其为抗原免疫BALB/c小鼠，经过3次亚克隆筛选后获得3株抗UL14蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为1B4、1B5和1F2。以免疫荧光分析（IFA）检测抗体的免疫反应性，结果显示1B4、1B5株抗体效价不低于1∶3 200,1F2株抗体效价不低于1∶2 000;WB检测结果显示3株抗体效价均不低于1∶8 000;间接ELISA检测结果显示腹水中抗体效价均不低于1∶12 800。UL14蛋白抗原表位鉴定结果显示，1B4识别的抗原表位为¹MFASDRRERRVRLAEAFQRE²⁰,1B5与1F2识别的抗原表位推测为³³GRADKKNPEFVRAFMAAK-QAR⁵³。PRV感染易感细胞后，利用制备的单克隆抗体通过IFA检测UL14蛋白的时序表达情况，发现其时序表达情况与gC类似，利用RT-qPCR对UL14基因的时序表达进行验证，检测结果同IFA一致，表明UL14为PRV晚期基因。采用IFA检测病毒感染后UL14的亚细胞定位，发现UL14蛋白能由细胞质转移至细胞核，并且随着感染时间的延长，UL14蛋白在细胞核中表达增加。本研究为深入探究PRV UL14蛋白的功能提供了良好的研究工具，为PRV UL14蛋白介导的病毒复制机制研究奠定了一定的基础。

关键词

伪狂犬病病毒 / 间质蛋白UL14 / 单克隆抗体 / 亚细胞定位