香芹酚缓解LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症与内质网应激

摘要

采用体外细胞培养，探讨了香芹酚对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应及内质网应激的调控作用。通过Western blot技术对比分析健康与患病乳腺组织，发现乳腺炎样本中NF-κB通路相关蛋白和内质网应激标志蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。设置空白对照组和不同浓度香芹酚组(50、100、250、500、750、1 000μmol/L),培养24 h后采用CCK-8法检测细胞增殖情况。使用LPS(10 mg/L)刺激MAC-T细胞(奶牛乳腺上皮细胞系)12 h构建炎症模型，测定炎症相关基因IL-6、IL-1β及TNFα的转录水平，IL-6、IL-1β和TNFα的mRNA表达水平。将MAC-T细胞分为低、中、高剂量香芹酚预处理组，分别用不同浓度香芹酚预处理12 h,随后加入LPS刺激12 h。运用分子对接方法分析香芹酚与内质网应激关键蛋白GRP78的相互作用。随后通过实时荧光定量PCR(qPCR)分析炎性因子(如IL-6、IL-1β、TNFα)mRNA表达情况，同时使用Western blot分析NF-κB通路蛋白(p-IκB、p NF-κB p65)和内质网应激相关蛋白(如p-PERK、p-IRE1α、ATF6、GRP78、CHOP)的表达水平。Western blot和qPCR结果表明，香芹酚确可通过抑制NF-κB信号通路和内质网应激，缓解了LPS诱导的炎症反应和细胞损伤。

关键词

香芹酚 / NF-κB通路 / 内质网应激 / 奶牛乳腺炎