血清4型禽腺病毒激活PI3K/Akt信号通路

摘要

旨在探究血清4型禽腺病毒（fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）感染LMH细胞PI3K/Akt信号通路的激活情况及其对病毒复制的影响。首先测定FAdV-4的TCID₅₀,以适宜感染复数（MOI）感染LMH细胞。采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测感染后不同时间点PI3K、GSK-3β和FOXO基因的表达水平。为明确PI3K/Akt通路在病毒复制中的作用，用PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后进行病毒感染，qPCR检测病毒复制水平的变化，Western blot分析Akt、磷酸化Akt（P-Akt）及磷酸化GSK-3β（P-GSK-3β）的蛋白表达水平。结果显示，FAdV-4的TCID₅₀是0.1 mL 10^-4.36;与对照组相比，FAdV-4感染后显著上调了PI3K、GSK-3β和FOXO基因的表达水平，其表达峰值分别出现在感染后72、72和96 h,分别为对照组的9.67倍（P<0.01）、1.71倍（P<0.05）、5.38倍（P<0.01）;Western blot分析表明，Akt、P-Akt、P-GSK-3β蛋白在6～96 h均检测到相应条带，且维持较高的表达水平。LY294002处理后显著抑制病毒复制，降低P-Akt和P-GSK-3β的磷酸化水平。结果表明，PI3K/Akt信号通路在FAdV-4感染过程中被激活，并可能通过调控下游效应分子参与病毒复制过程。

关键词

血清4型腺病毒(FAdV-4) / LMH细胞 / PI3K/Akt / 病毒复制