禽偏肺病毒多表位DNA疫苗的构建及其免疫原性分析

摘要

为构建禽偏肺病毒（avian metapneumovirus, aMPV）G和F蛋白的抗原多表位DNA疫苗，并对其免疫反应进行分析，本研究采用免疫信息学方法对aMPV G及F蛋白进行优势抗原表位筛选，并设计了多表位基因W。通过ProtParam、VaxiJen、ExPASy、TMHMM和SOPMA等在线软件预测分析了其理化性质、亲水性、跨膜区、蛋白二级结构及三级结构等生物学信息，并将表位基因W、串行基因G-F（G）以及W-G-F（D）与真核表达载体pEGFP-N1进行了连接，获得的重组质粒pEGFP-W、pEGFP-G和pEGFP-D分别转染到HEK293T细胞中，并采用Western blot方法确定目标蛋白的表达情况。对7日龄的雏鸡进行重组质粒肌内注射，二免后检测免疫鸡血清中的特异性抗体IgG、细胞因子和T淋巴细胞的含量。结果显示，所构建的表位蛋白具有结构稳定、免疫原性良好，并且没有副作用等特点。重组质粒pEGFP-W、pEGFP-G和pEGFP-D目的基因序列与预期一致，能够在真核细胞中表达出目的蛋白，且没有显著的细胞毒性。相较于pEGFP-N1和PBS组，pEGFP-D组经过二次免疫后，免疫鸡的血清中抗aMPV IgG抗体的水平明显上升（P<0.01）,与pEGFP-W组的水平相似；在pEGFP-D组鸡的血清中，细胞因子IFN-γ、IL-2的水平，以及CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞的含量也都明显高于pEGFP-N1和PBS组（P<0.01）。综上，构建的pEGFP-D多表位DNA疫苗能够激发鸡的体液和细胞免疫反应，为开发预防aMPV的多表位疫苗提供了坚实的基础。

关键词

禽偏肺病毒 / G蛋白 / F蛋白 / W基因 / 多表位疫苗