对虾白斑综合征病毒荧光RAA检测方法的建立和应用

摘要

针对常见且危害极大的对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)建立荧光型重组酶介导核酸扩增技术(recombinase aided amplification, RAA)。针对WSSV高保守性基因vp28设计多对RAA引物，并筛选出核酸扩增效率最高的引物。在此基础上，优化荧光型RAA反应体系，根据反应体系的优化结果制备WSSV荧光RAA试剂盒，最后对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、稳定性和实际样本应用情况进行评估。结果显示，试剂盒具备良好的特异性，只对WSSV敏感，对其他造成混合感染的病原无反应。灵敏度高：最低检出限为2.744 copies/μL;精密度高：重复性结果的变异系数(Cv)小于5%;稳定性良好：试剂盒在-20℃可以稳定保存1年，在室温(25℃)和夏日高温(37℃)天气条件下也可以实现多日的稳定运输、使用和保藏。以OIE推荐的荧光定量PCR方法为参考，对60份对虾临床样品进行检测，结果显示，试剂盒的检测准确率为98.00%(59/60),灵敏度为100.00%(29/29),特异性为96.77%(30/31)。而且本试剂盒在37℃下21 min就可以实现检测，操作方便，适用于现场检测。综上所述，建立的WSSV荧光RAA试剂盒具备快速、灵敏度高、特异性强、精密度高、稳定性良好和操作简便等特点，在水产疫病精准快速检测中具有广泛的市场应用前景。

关键词

对虾白斑综合征病毒 / vp28基因 / 荧光RAA