口蹄疫O型多表位VLP抗原的可溶性表达及其免疫原性

摘要

为了提高重组口蹄疫（foot-and-mouth disease, FMD）多表位病毒样颗粒（virus-like particle, VLP）抗原在大肠杆菌表达系统中的可溶性表达和VLP组装率，保证VLP结构及抗原的功能，本研究将实验室构建的pET-30a/OME4-VLP重组表达质粒与分子伴侣质粒pTf16共转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，通过LAB（Kan⁺）筛选阳性重组菌，并优化诱导表达条件，实现口蹄疫O型VLP抗原在大肠杆菌的可溶性表达和正确组装，同时，通过蔗糖密度梯度纯化蛋白、透射电镜检测VLP粒径、Western blot和免疫小鼠试验评价其免疫活性。结果显示，pTf16显著提高了OME4-VLP的可溶性表达量，且在培养基中添加L-阿拉伯糖（1 g/L）与IPTG（80μmol/L）低温诱导（16℃）20 h后，可溶性蛋白的表达量达到峰值；透射电镜观察可见OME4-VLP呈典型的VLP结构，约为28 nm,与预期大小相符；Western blot结果显示，可溶性蛋白能与口蹄疫O型单克隆抗体发生特异性免疫反应；免疫小鼠结果显示，与包涵体组和对照组相比，可溶性OME4-VLP免疫组的血清抗体水平和细胞免疫反应均高于包涵体组和对照组（P<0.05）。综上，本研究结果显示，OME4-VLP抗原在pTf16分子伴侣的协同作用下，实现了在大肠杆菌表达系统中可溶性自组装，增强了重组蛋白的免疫原性，为利用大肠杆菌规模化生产的口蹄疫多表位VLP疫苗提供了基础资料。

关键词

口蹄疫病毒 / 病毒样颗粒 / 分子伴侣 / 可溶性表达