细粒棘球绦虫 LAP 基因的原核表达及对犬PBMCs的影响

摘要

通过生物信息学分析、原核表达和rEgLAP对犬外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)的影响，探究细粒棘绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)亮氨酸氨基肽酶(leucine aminopeptidase, LAP)的生物学功能，为之后研究抗Eg疫苗提供基础数据。从NCBI GenBank数据库中获取细粒棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶(EgLAP)的基因序列，采用生物信息学软件分析该基因的B细胞抗原表位等。先通过原核表达成功制备重组蛋白，随后采用Western blot技术对其抗原性进行分析；同时利用实时荧光定量PCR检测EgLAP基因在原头蚴与成虫中的相对转录水平，并从NCBI数据库下载EgLAP基因序列构建进化树；最后，结合细胞增殖试验与qPCR检测，评价LAP对犬PBMCs功能的影响。结果显示，成功克隆了EgLAP基因的ORF编码序列大小为1 608 bp。经SDS-PAGE验证，rEgLAP蛋白相对分子质量为66 kDa; Western blot分析显示重组蛋白成功被犬的阳性血清识别；实时荧光定量PCR检测该基因在成虫阶段表达量高于原头蚴阶段(P<0.000 1)。重组蛋白对犬PBMCs的增殖没有显著性影响(P>0.050 0),qPCR结果显示，重组蛋白对犬PBMCs细胞因子IL-17A和IFN-γ的分泌表达具有调控作用(P<0.000 1)。初步证实rEgLAP拥有良好的免疫原性，具有成为Eg终末宿主疫苗的潜力。

关键词

细粒棘球绦虫 / 亮氨酸氨基肽酶 / 原核表达 / 外周血单个核细胞