猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的杆状病毒表达及其单克隆抗体的制备

摘要

应用杆状病毒真核表达系统体外表达并通过Ni柱亲和纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)全长NSP9蛋白(NSP9编码PRRSV RNA依赖的RNA聚合酶，RdRp),然后用其免疫BALB/c小鼠。取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤SP20细胞进行融合，通过间接ELISA方法筛选抗体阳性杂交瘤细胞，经过筛选和亚克隆，获得1株阳性杂交瘤细胞株，制备腹水并进行效价测定，最后应用免疫印迹(Western blot)、间接免疫荧光(IFA)和免疫共沉淀(Co-IP)试验验证其反应性、特异性及应用性能。结果显示，成功获得可溶性全长NSP9蛋白；并得到1株能稳定分泌抗NSP9单克隆抗体的细胞株，命名为3F6;所制备的腹水效价可达到1∶1 280 000;经鉴定该抗体重链属于Ig-1型，轻链为κ链，仅特异性识别PRRSVⅡ型毒株。Western blot、IFA和Co-IP试验结果显示，该抗体具有良好的反应性、特异性和应用性能。结果表明，成功制备了PRRSV NSP9单克隆抗体，为PRRSV特异性检测、免疫学血清诊断试剂的研发及研究PRRSV RdRp决定的病毒复制功能奠定了重要的基础。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / NSP9 / 单克隆抗体 / RdRp