基于不同启动子调控禽腺病毒4型纤突基因表达的重组火鸡疱疹病毒构建及其生物学特性分析

丁方舟; 叶伟成; 华炯钢; 陈柳; 霍苏馨; 朱寅初; 倪征; 付媛; 刘士哲; 李鑫基; 张存; 王晓杜; 云涛

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.01.04

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (1) : 26 -36. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.01.04

基于不同启动子调控禽腺病毒4型纤突基因表达的重组火鸡疱疹病毒构建及其生物学特性分析

丁方舟, 叶伟成, 华炯钢, 陈柳, 霍苏馨, 朱寅初, 倪征, 付媛, 刘士哲, 李鑫基, 张存, 王晓杜, 云涛

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摘要

利用Red/ET同源重组技术将禽腺病毒4型（fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）纤突蛋白基因Fiber1和Fiber2插入火鸡疱疹病毒（herpesvirus of turkeys, HVT）-BAC载体的UL53-UL54基因间区，构建含CMV、PEC、RSV及gC启动子的8种重组质粒（如pHVT-CMV-Fiber1/2、pHVT-gC-Fiber1/2）,转染鸡胚成纤维细胞（chicken embryo fibroblasts, CEF）拯救重组病毒。通过Western blot和间接免疫荧光（indirect immunofluorescence, IFA）检测蛋白表达，绘制病毒生长曲线评估增殖能力，并对1日龄SPF雏鸡进行免疫攻毒试验，采用ELISA和qPCR分析抗体水平及泄殖腔排毒量。结果显示，CMV启动子驱动的重组病毒（rHVT-CMV-Fiber1/2）在CEF中高效表达目标蛋白（Fiber1:60 kDa, Fiber2:65 kDa）;免疫后，高剂量组(1×10～5 TCID₅₀)抗体水平于4周达峰值D₄₅₀值为0.23±0.02,高于其他启动子；攻毒后，rHVT-CMV-Fiber1组泄殖腔病毒载量较对照组降低2.5个数量级(10^3.2拷贝/μL比较10^5.7拷贝/μL,P<0.000 1)。UL53-UL54位点的外源基因插入未显著影响病毒复制（P>0.05）。CMV启动子驱动的HVT载体疫苗可高效表达FAdV-4抗原并诱导强效免疫应答，显著抑制病毒排出。