PRV变异株TK/gE/gI/US9/US2五基因缺失株的构建及免疫原性分析

谢紫云; 杨雨川; 张鹤腾; 杨志华; 雷白时; 赵款; 张云航; 袁万哲; 张武超

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.01.05

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (1) : 37 -46. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.01.05

PRV变异株TK/gE/gI/US9/US2五基因缺失株的构建及免疫原性分析

谢紫云, 杨雨川, 张鹤腾, 杨志华, 雷白时, 赵款, 张云航, 袁万哲, 张武超

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摘要

以本实验室重组构建的猪伪狂犬病病毒（recombinant porcine pseudorabies virus, rPRV） gE^-/gI^-/US9^-/US2^-四基因缺失病毒为基础，利用CRISPR/Cas9基因编辑和同源重组技术进一步将其TK基因缺失，构建和拯救不携带外源标记基因的TK、gE、gI、US9和US2五基因缺失病毒，经有限稀释法纯化和PCR鉴定正确后，命名为rPRV TK^-/gE^-/gI^-/US9^-/US2^-;随后，在体外测定病毒的生物学特性，并在小鼠体内对五基因缺失病毒进行安全性与免疫原性评价。体外试验结果显示，拯救的rPRV TK^-/gE^-/gI^-/US9^-/US2^-五基因缺失病毒在荧光显微镜下未观察到绿色荧光，而带EGFP标签的rPRV TK^-/gE^-/gI^-/US9^-/US2^--EGFP重组病毒可观察到绿色荧光；rPRV TK^-/gE^-/gI^-/US9^-/US2^-五基因缺失病毒具有与四基因缺失病毒及野生型病毒相似的病毒滴度和生长动力学曲线，但其在细胞上形成的蚀斑直径较小。动物试验结果显示，rPRV TK^-/gE^-/gI^-/US9^-/US2^-五基因缺失病毒对小鼠的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀)大于10⁶TCID₅₀（50%tissue culture infectious dose,半数组织培养物感染量）,是野生型病毒的1 000倍以上，且其安全性显著优于四基因缺失病毒，并可诱导产生较高水平的gB抗体和中和抗体。结果表明，本试验制备了PRV变异株TK、gE、gI、US9和US2五基因缺失病毒，且其具有较高的安全性和免疫原性，为研制PRV基因缺失弱毒活疫苗奠定基础，同时也为快速操作其他疱疹病毒的基因组提供技术参考。