鸭甲型肝炎病毒血清3型的分离鉴定、全基因组特征及致病性分析

摘要

应用临床阳性样本进行鸭甲型肝炎病毒血清3型（duck hepatitis A virus type 3,DHAV-3）毒株的分离，并利用RT-PCR方法对分离毒株的基因组进行扩增、序列比对分析确定其遗传进化关系。分离毒株分别感染无母源抗体鸭胚，通过测定ELD₅₀比较毒株对鸭胚的致病力；将毒力最强和最弱毒株分别感染5日龄健康雏鸭，记录发病及死亡情况，对雏鸭心脏、肝脏和脾脏组织进行石蜡切片制作，HE染色后观察组织病理变化，分析其对雏鸭的致病性。应用无母源抗体鸭胚自山东菏泽和河北石家庄4个规模化养殖场中成功分离到4株DHAV-3病毒，分别将其命名为HZ-1、HZ-2、HZ-3和HB-1株。序列测定结果显示，分离毒株的全基因组长分别为7 787、7 786、7 785、7 788 bp; G+C含量分别为42.25%、42.15%、42.11%和42.15%。系统进化树分析结果显示，4株DHAV-3病毒与我国山东、安徽、江苏和四川地区毒株的亲缘关系最近，与越南、韩国和黑龙江地区毒株亲缘关系相对较远。鸭胚致病性试验结果显示，HZ-1、HZ-2、HZ-3和HB-1株的半数胚致死量(egg lethal dose, ELD₅₀)分别为10^-7.0/0.2 mL、10^-7.2/0.2 mL、10^-6.3/0.2 mL和10^-7.5/0.2 mL,均属于高致病性毒株。将HB-1株和HZ-1株分别腹腔接种健康雏鸭，观察期内2组雏鸭的病死率均为20%,RT-PCR检测感染率为100%;病理组织学观察显示，肝细胞肿胀、脂肪变性，脾脏出血、坏死，伴有炎症细胞浸润，心脏出血、充血，局部坏死，并伴有炎症细胞浸润。该结果为了解我国DHAV-3田间毒株的分子特征和致病性及开发相关诊断试剂、疫苗和卵黄抗体等生物制品奠定了基础。

关键词

鸭甲型肝炎病毒血清3型 / 分离与鉴定 / 遗传进化分析 / 致病性