鸽痘病毒Taqman荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

针对鸽痘病毒（pigeonpox virus, PGPV）保守区域4b基因（GenBank登录号：ON375849）设计特异性引物和探针，以重组阳性质粒为模版，通过反应条件的优化，建立可检测PGPV核酸的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示：PGPV阳性质粒在3×10～8～3×10～1拷贝/μL浓度范围内，标准曲线（Y=-3.85X+44.98,R²=0.993 3）显示拷贝数与其Ct值之间具有良好线性关系；建立的方法与10种禽类常见病毒无交叉反应，能有效区分FPV和PGPV混合感染；敏感性试验结果显示，该方法对PGPV阳性质粒最低检测限为25拷贝/μL,比常规PCR敏感1 000倍；重复性试验结果显示，组内和组间变异系数均低于2.92%;在符合性试验中，该方法检出结果与真实值的符合率为100%,高于其他检测方法（普通PCR为85.71%,多重PCR为71.40%）。以建立方法检测临床样本67份，结果显示56份样本为阴性，11份样本为阳性。结果表明，本研究所建立的检测方法具有特异性好、灵敏度高、可定量检测等优点，适合临床检测，为PGPV的流行病学调查、监测及防控提供技术支撑。

关键词

鸽痘病毒 / TaqMan探针 / 荧光定量PCR