禽呼肠孤病毒和血清4型禽腺病毒二重微滴式数字PCR检测方法的建立

摘要

为了建立禽呼肠孤病毒(ARV)和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)二重微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法，本试验根据ARV S1133毒株S1基因序列和FAdV-4 GX2019-010的hexon基因序列保守区设计特异性引物和探针。通过筛选引物和优化反应条件后，建立了二重ddPCR定量检测ARV和FAdV-4的方法，并对建立方法的灵敏度、重复性和特异性进行了测试。结果显示：在引物与探针浓度为2∶1的情况下，筛选得到ARV-JC-F1/ARV-JC-R1、FAdV-4-JC-F1/FAdV-4-JC-R1的反应更好；最佳退火温度为59℃;最低能检测到的ARV和FAdV-4标准品质粒DNA浓度分别为32.67、5.27拷贝/μL;对连续稀释的ARV和FAdV-4标准品质粒DNA检测结果的变异系数均小于15%,同时检测其他多种禽类病毒，均为阴性；以建立的ARV和FAdV-4二重ddPCR和实时荧光PCR同时检测10份临床样品，结果显示一致。结果表明，本研究建立的二重ddPCR方法可定量检测ARV及FAdV-4,具有灵敏度高、重复性好、特异性强等特点，为绝对定量检测ARV及FAdV-4提供了有效的检测技术手段。

关键词

禽呼肠孤病毒 / 血清4型禽腺病毒 / 微滴式数字PCR / 绝对定量