牛种布鲁菌S19疫苗株鉴别PCR检测方法的建立及应用

摘要

本研究建立1种能够快速鉴别牛种布鲁菌S19株的方法，并初步评价其应用价值。通过基因组共线性分析，鉴定牛种布鲁菌S19与A19基因组特异性区间，设计特异性引物。筛选出1对S19株PCR检测引物，建立了S19疫苗株鉴别诊断PCR检测方法，对该方法进行优化后，进行特异性、灵敏度试验以及临床样本检测。结果表明，利用筛选出的最适引物建立了S19疫苗株鉴别诊断PCR检测方法，能特异性扩增出2个目的条带：S19(249 bp)、A19(954 bp),探索出最佳延伸时间和退火温度分别为20 s和60℃;对布鲁菌标准株及疫苗株DNA样品(S2308、M28、M5、M5-90、M5-90Δbp26、Rev.1、S2)也能进行区分；与其他病原(牛结核分枝杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、牛支原体、大肠埃希菌、小肠结肠耶尔森菌)无交叉反应；对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数S19为10～1拷贝/μL、A19为10～2拷贝/μL;46份布鲁菌临床样品经检测均符合预期。本研究建立的鉴别PCR方法可用于布鲁菌S19感染的快速鉴别诊断及流行病学调查，具有临床便捷、快速诊断的特点。

关键词

布鲁菌 / PCR / S19 / A19