鼠源甘露糖受体CTLD 4-5结构域蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

为表达鼠源甘露糖受体(MR)胞外结构域CTLD 4-5蛋白，制备多克隆抗体，本研究使用BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中扩增MR CTLD 4-5基因，并构建至pET-30a(+)载体，转化至BL21(DE3)感受态后进行蛋白表达；将纯化后的MR CTLD 4-5蛋白免疫獭兔，制备多克隆抗体。试验结果表明，MR CTLD 4-5蛋白可成功在原核表达系统中表达，并在16℃、150 r/min、IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导表达时间12 h时，表达量最高；Western blot结果显示，制备的兔源多克隆抗体可与CTLD 4-5蛋白出现特异性条带，且稀释度可达1∶100 000。IFA试验表明，该多克隆抗体能够与小鼠腹腔巨噬细胞反应，出现绿色荧光信号，且与猪肺泡巨噬细胞(PAM)存在交叉反应。综上所述，本研究成功表达出MR CTLD 4-5蛋白，制备的兔源多克隆抗体与MR CTLD 4-5蛋白发生特异性反应，并且识别小鼠腹腔巨噬细胞及PAM细胞表面的MR,为MR在免疫细胞中的功能研究奠定了基础。

关键词

甘露糖受体 / 原核表达 / 多克隆抗体 / 小鼠