牛病毒性腹泻病毒和牛肠道病毒SYBR Green Ⅰ双重qPCR检测方法的建立

摘要

为实现牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与牛肠道病毒(BEV)的同步检测，靶向BVDV和BEV 5′-UTR序列保守区域，分别设计1对引物，建立针对BVDV与BEV的SYBR GreenⅠ双重qPCR检测方法。结果显示，该方法可特异性检出BVDV和BEV,两者熔解峰所对应的Tm值分别为87、82℃,而对其他常见牛病原体无特定熔解峰。BVDV和BEV的最低检测值分别为81.3、81.7拷贝/μL;批内及批间的相对标准偏差均被有效控制在2%的限定水平。运用建立的SYBR GreenⅠ双重qPCR检测方法对2023—2024年采自河南、山东以及四川等地牛场的44份粪便样品进行检测，BVDV和BEV的检出率分别为75.00%(33/44)和77.27%(34/44),两者共感染检出率为50%(22/44)。该方法为BVDV和BEV同步检测提供了一种快速、灵敏且特异的解决方案。

关键词

牛病毒性腹泻病毒 / 牛肠道病毒 / SYBR GreenⅠ / 双重qPCR检测方法