鉴别BVDV-1、BEV、BRV-A、BCoV的四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

摘要

为了对牛腹泻病进行快速鉴别诊断，本研究根据牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)的5′-UTR基因、牛肠道病毒(BEV)的5′-UTR基因、牛轮状病毒A型(BRV-A)的VP6基因、牛冠状病毒(BCoV)的N基因保守区，设计了特异性引物与探针，通过优化建立了同时检测BVDV-1、BEV、BRV-A和BCoV的四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示，该方法具有较强的特异性；BVDV-1、BEV、BRV-A的最低检测限均可达到10～1拷贝/μL,BCoV的最低检测限为10～2拷贝/μL;批内及批间变异系数均小于1%,表明该方法重复性好；运用该方法和PCR检测方法对采自内蒙古呼伦贝尔市、通辽市的121份牛粪便样品进行检测，结果显示，BVDV-1、BEV、BRV-A、BCoV的检出率分别为6.61%、39.66%、9.91%、10.74%,检出率均高于PCR检测方法，且上述4个病原的符合率分别为99.17%、95.86%、98.34%、98.34%。结果表明，建立的四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可以用于牛腹泻病原BVDV-1、BEV、BRV-A、BCoV高通量一站式诊断。

关键词

牛病毒性腹泻病毒1型 / 牛肠道病毒 / 牛轮状病毒A型 / 牛冠状病毒 / 四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法