基于悬浮MDCK细胞培养的H5N6流感减毒活疫苗小规模生产工艺的优化

摘要

为建立H5N6冷适应疫苗候选株FS17的高效培养及纯化工艺体系，以血凝效价和病毒半数组织感染剂量(TCID₅₀)为指标，对疫苗株在MDCK悬浮细胞上培养的细胞感染复数（MOI）、细胞接种密度（CCI）、TPCK胰酶终浓度及收获时间进行优化；进而评估不同终浓度的核酸酶反应不同时间对DNA的消化能力，筛选出聚醚砜膜、再生纤维素复合膜和Omega膜的病毒浓缩性能与最佳孔径，探索了以复合填料Capto Core 700柱层析纯化时平衡缓冲液的盐离子浓度及Capto Q柱层析纯化时平衡缓冲液与洗脱缓冲液的浓度梯度。结果显示，确定最优培养条件为MOI 0.001,CCI 4.0×10～6个/mL,TPCK胰酶3 mg/L,收毒时间84 h;建立的纯化工艺为：采用15 U/mL核酸酶处理6 h去除宿主DNA,300 kDa再生纤维素复合膜超滤浓缩，依次经Capto Core 700（平衡缓冲液为0.02 mol/L PB）和Capto Q（平衡缓冲液为0.01 mol/L PB,洗脱缓冲液为0.01 mol/L PB+0.65 mol/L NaCl）两步层析进行纯化。最终获得高纯度疫苗原液，为减毒流感疫苗的规模化生产提供了关键技术参数。

关键词

流感病毒 / 减毒疫苗 / 超滤浓缩 / 层析纯化 / 工艺优化