禽偏肺病毒C型荧光RT-LAMP快速检测方法的建立

摘要

旨在开发一种特异性快速检测C型禽偏肺病毒(avian metapneumovirus type C,aMPV/C)的方法。基于aMPV/C-M保守基因设计特异性靶向引物和探针，筛选最佳引物，优化检测体系探针浓度和反应温度，建立aMPV/C荧光探针型逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法，评估其敏感性、特异性和重复性，并用于临床样品检测。结果显示，建立的荧光探针型RT-LAMP方法只特异性检测出aMPV/C,与禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒、鸡毒支原体等14种常见的禽类病原体无交叉反应，最低检测限为12拷贝/μL,与浊度法RT-LAMP敏感性相当，显著高于RT-PCR敏感性，批内和批间重复变异系数均小于3%。临床样本验证结果显示，用3种方法检测139份临床样品，荧光RT-LAMP与浊度法RT-LAMP阳性检出率均为17.30%,比RT-PCR检出率高。结果表明，本研究建立的荧光探针型RT-LAMP检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，适用于临床样品的aMPV/C快速检测。

关键词

禽偏肺病毒C型 / 环介导等温扩增 / 荧光探针 / 快速检测