柔嫩艾美耳球虫14-3-3的定位及其与佐剂配伍的免疫保护效果评价

孙雪; 吴天乐; 胡紫茵; 李斌玉; 李芳; 毕师诚; 周荣琼

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.03.16

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (03) : 588 -596. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.03.16

柔嫩艾美耳球虫14-3-3的定位及其与佐剂配伍的免疫保护效果评价

孙雪, 吴天乐, 胡紫茵, 李斌玉, 李芳, 毕师诚, 周荣琼

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摘要

为探讨柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)14-3-3蛋白的定位及其与佐剂配伍的免疫保护效果，通过构建重组质粒pCold TF/Et14-3-3,经原核表达后制备兔抗Et14-3-3多克隆抗体；采用qRT-PCR分析Et14-3-3在第2代裂殖子(MZ)、未孢子化卵囊(UO)、孢子化卵囊(SO)和子孢子(SZ)的转录水平，并通过间接免疫荧光组织化学(IFA)分析Et14-3-3蛋白的组织定位和亚细胞定位；利用150μg Et14-3-3蛋白与人参皂甙、IL-2、黄芪多糖、铝胶佐剂和弗氏佐剂等配伍免疫雏鸡，同时设置未免疫攻虫组(PC)和未免疫未攻虫组(NC)为对照，以平均增重、相对增重率、卵囊产量、病变记分、抗球虫指数(ACI)和IgG抗体水平等指标，综合评价Et14-3-3蛋白的免疫保护性。结果显示，Et14-3-3蛋白大小约为85 kDa,主要以可溶性形式表达；能被鸡抗E.tenella阳性血清特异性识别。IFA结果显示Et14-3-3主要定位于MZ的胞质和细胞表面以及SZ的顶端，且MZ中mRNA转录水平显著高于SZ(P<0.000 1)。Et14-3-3蛋白与5个佐剂配伍的IgG抗体水平均呈上升趋势；其中铝胶佐剂组的ACI最高，为168.8,卵囊产量和病变记分显著降低，平均增重和相对增重率显著增加(P<0.05)。结果表明，Et14-3-3蛋白与虫体宿主识别和入侵有关，与铝胶佐剂配伍的免疫保护效果为中效，对E.tenella感染具有一定的免疫保护力。