猪天然抗病毒分子APOBEC3F对猪内源性反转录病毒的抑制作用

摘要

利用猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(porcine apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide-like 3F,pA3F)过表达及RNA干扰等手段调节PK-15细胞中pA3F表达量，通过相对荧光定量PCR及ELISA方法对猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus, PERV)pol基因mRNA及PERV反转录酶变化进行检测发现，在pA3F过表达的PK-15细胞中PERV pol基因mRNA与PERV反转录酶水平与对照相比显著降低(P<0.05),在转染30μg pA3F表达载体的试验组改变最显著，PERV pol基因mRNA变化水平达到0.252±0.032,反转录酶降低至(6.85±0.69) pg/孔，且变化与pA3F的表达量之间具有剂量依赖关系；在pA3F下调细胞中PERV pol基因mRNA与PERV反转录酶水平与对照组比较显著提高(P<0.05),其中以沉默pA3F的740～764 bp的序列最有效，pol基因mRNA增长到(4.172±0.251)倍，反转录酶达到(88.58±1.46) pg/孔。pA3F基因转染的PK-15细胞培养上清收集的PERV病毒粒子，免疫印迹检测证实病毒粒子中含有pA3F蛋白；通过酵母双杂交试验与免疫共沉淀试验证实pA3F与PERV Gag蛋白存在相互作用；激光共聚焦扫描显微镜细胞共定位观察也证实2种蛋白在PK-15细胞中存在共定位。结果表明，PK-15细胞中pA3F对PERV的复制具有抑制作用，并且pA3F是在PERV Gag蛋白的协同下被包装进PERV病毒粒子从而发挥其作用。本试验为猪异种移植PERV病毒安全性研究提供了潜在的新靶标，也为研究APOBEC分子与反转录病毒之间的相互作用及病毒逃逸该作用的机制奠定了基础。

关键词

猪内源性反转录病毒 / APOBEC3F / 病毒复制 / 蛋白质相互作用