表达PEDV S1D表位重组猪伪狂犬病毒的构建及拯救

宋幸辉; 宋金星; 王攀; 张晓战; 郭运泽; 彭志锋; 赵丽; 陈红英

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.04.03

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (04) : 724 -730. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.04.03

表达PEDV S1D表位重组猪伪狂犬病毒的构建及拯救

宋幸辉, 宋金星, 王攀, 张晓战, 郭运泽, 彭志锋, 赵丽, 陈红英

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摘要

为构建猪流行性腹泻病毒(PEDV) S1D表位的重组伪狂犬病病毒rPRV-pGS1D,首先从实验室保存的pMD18-S1重组质粒中扩增克隆S1D基因，将其连接至pMD18-T载体。经BamHⅠ酶切及测序验证，确认获得重组质粒pMD-S1D。进一步将S1D片段经BamHⅠ酶切后，克隆至同样酶切并去磷酸化的pG载体中，转化DH5α感受态细胞。通过PCR、酶切和测序鉴定，成功构建重组转移质粒rPRV-pGS1D。采用脂质体转染法将该重组转移质粒与PRV Bartha-K61共转染ST细胞，经荧光观察、噬斑纯化及筛选，获得稳定表达S1D的重组病毒rPRV-pGS1D。对纯化病毒进行PCR、Western blot及IFA检测，结果证实其遗传稳定性良好。本研究成功构建了稳定表达PEDV S1D表位的重组病毒rPRV-pGS1D,为开发PRV/PEDV二价活载体疫苗提供了理论基础。