检测牛病毒性腹泻病毒信号增强型胶体金免疫层析试纸条的研制

摘要

基于酶信号放大系统研制了检测牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）的信号增强型胶体金免疫层析试纸条。优化后稳定胶体金溶液所需酶标抗体的最适质量浓度为53.2 mg/L,最佳标记pH值为8.5;确定金标垫处理液为0.1%Tween-20、0.1%Triton-100、3%蔗糖、0.1%PVA和1%BSA的PB溶液，样品垫处理液为0.1%Tween-20、0.1%Triton-100、3%蔗糖和0.5%BSA的PB溶液；抗体包被液为0.01 mol/L PB溶液，NC膜封闭液为3%BSA,质控线包被山羊抗鼠IgG抗体质量浓度为1.0 g/L,检测线包被的单抗4D11质量浓度为2.0 g/L。利用研制的信号增强型胶体金免疫层析试纸条对BVDV进行测试，最低检出量约为10～3 TCID₅₀/0.1 mL,与传统胶体金试纸条相比，检测灵敏度提高10倍，且具备良好的特异性、重复性和稳定性。对324份临床病料进行检测，结果显示BVDV阳性检出率为2.78%,与RT-PCR方法的阳性符合率为81.82%,阴性符合率为100%,总符合率为99.38%。综上，本研究应用酶信号放大系统对胶体金试纸条检测信号进行放大，建立了信号增强型胶体金免疫层析试纸条，为BVDV早期诊断、PI牛筛查及疫情防控提供了可靠的技术手段。

关键词

牛病毒性腹泻病毒 / 信号增强 / 胶体金免疫层析试纸条