1株猫疱疹病毒的分离鉴定与单克隆抗体的制备

摘要

本研究应用采集的临床疑似感染猫的口、鼻、眼拭子样本，经CRFK细胞培养、PCR鉴定与蚀斑纯化，成功获得1株可稳定传代的猪疱疹病毒1型(FHV-1)流行毒株，命名为FHV-BJ813。动物回归试验显示该毒株具有强致病性；序列测定与分析发现基因组存在局部碱基点突变及重复序列变异；全基因组进化树分析显示，该毒株与国内流行株高度同源。采用蔗糖密度梯度离心纯化病毒粒子，经β-丙内酯灭活后制备免疫原，免疫6周龄BALB/c小鼠。通过ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株，并鉴定其分泌抗体的亚类。利用蛋白质免疫印迹(Western-blotting)评估单克隆抗体的特异性。结果显示，共获得7株阳性杂交瘤细胞株，其中4株分泌IgG1型抗体，3株分泌IgG2b型抗体。Western-blotting分析表明H09和H10单克隆抗体能够特异性识别FHV病毒。该研究为后续疫苗研发和诊断制剂的研制奠定了基础。

关键词

猫疱疹病毒1型 / 流行毒株 / 分离鉴定 / 蚀斑纯化 / 单克隆抗体