基于猪胞内劳森菌强抗原性重组鞭毛蛋白LI0570的间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要

为了解猪胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)的流行情况并有效防控LI感染，本试验构建pET-32-LI0570重组质粒，经诱导表达和纯化后，采用Western blot鉴定其免疫反应性；基于已纯化的重组LI0570蛋白作为包被抗原，通过反应条件筛选建立LI抗体的间接ELISA检测方法。结果显示，LI0570重组蛋白以包涵体形式存在，Western blot验证重组蛋白能够与特异性抗体结合。间接ELISA优化条件：抗原最佳包质量浓度为2 mg/L,血清最佳稀释比例为1∶200,包被方案为37℃静置孵育2 h随后4℃孵育过夜，5%脱脂牛奶为最优封闭液，待检血清(一抗)和酶标二抗的最佳作用时间均为1 h。39份猪阴性血清样本确定的阴阳临界值为0.187,该方法仅与LI阳性特异性抗体结合，能够稳定识别稀释倍数高达3 200倍的阳性血清样本，重复性试验评估变异系数均小于10%。应用该方法检测河北省210份临床样本，结果显示阳性检出率为25.71%。结果表明，本试验建立的重组LI0570蛋白的间接ELISA检测方法为LI抗体检测和流行病学监测提供了技术支持。

关键词

胞内劳森菌 / 0570蛋白 / 原核表达 / 间接ELISA / 猪