PoRV和PEDV二联亚单位疫苗的免疫效果评价

摘要

选用包含多个优势抗原表位的猪轮状病毒（porcine rotavirus, PoRV）VP7和猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）COE基因构建重组质粒p32a-VP7₁、p32a-COE、p32a-VP7₁-COE,在大肠杆菌原核表达系统表达重组蛋白VP7₁、COE、VP7₁-COE,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，制备单价苗VP7₁、COE,混合苗VP7₁+COE和融合蛋白苗VP7₁-COE,在小鼠体内通过ELISA方法评估血清中特异性IgG、IgA抗体水平和IgG2a、IgG1分型情况，通过中和试验和间接免疫荧光试验评估病毒中和能力，通过测定细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平综合评估所制备亚单位疫苗的免疫效果。结果显示，本研究获得了高纯度的重组蛋白VP7₁、COE、VP7₁-COE,免疫后能诱导小鼠产生高水平特异性IgG抗体，且VP7₁-COE组优于VP7₁+COE组；IgG2a、IgG1检测免疫类型偏向于Th1型细胞免疫；IgA抗体水平无大幅度升高；VP7₁+COE组和VP7₁-COE组产生的中和抗体水平相当，且持续时间相对于单苗组增长，中和病毒能力良好；此外，疫苗免疫后均增加了IFN-γ和IL-4的表达水平，且VP7₁-COE组优于单苗组和VP7₁+COE组。结果表明，本研究制备的二联亚单位疫苗VP7₁-COE免疫效果良好，可诱导高水平的细胞免疫和体液免疫应答，为PoRV和PEDV研发安全高效的新型二联亚单位疫苗和PoRV、PEDV的有效防控奠定了基础。

关键词

PoRV / PEDV / VP7蛋白 / COE蛋白 / 二联亚单位疫苗