稳定过表达人ANT2的HEK293T细胞系构建及功能验证

摘要

旨在构建一株稳定过表达腺苷酸转位酶2(ANT2)的细胞系，用于研究ANT2调控病毒感染的作用及机制。利用Tet-On诱导型表达系统，通过克隆人ANT2基因，将其构建到慢病毒表达质粒pLVX-TRE3G中，并与辅助质粒pLVX-Tet3G共转染至HEK293T-ACE2细胞。经嘌呤霉素和G418加压筛选和Western blot鉴定，本试验成功构建一株稳定过表达ANT2的细胞系HEK293T-ACE2-ANT2。对该细胞系表达ANT2的诱导剂量和诱导时间进行了筛选优化后，以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染该细胞系，通过qPCR和Western blot检测病毒感染水平。结果显示，在6 mg/L多西环素(Doxycycline)诱导12 h时后，ANT2表达量达到最高；当诱导表达ANT2时，SARS-CoV-2感染后的病毒核酸载量及N蛋白表达水平显著降低，表明ANT2对SARS-CoV-2的感染和复制具有抑制作用。本研究为进一步探究ANT2在抗病毒感染中的作用提供了细胞模型和实验基础。

关键词

腺苷酸转位酶2 / Tet-On诱导表达系统 / HEK293T细胞 / 新型冠状病毒