基因缺失型减毒猴痘病毒的构建及筛选

侯爽; 尚超; 蒋琦炜; 刘子睿; 朱羿龙; 韩继成; 赵仁双; 谢岚锦; 李一权; 刘艳; 李霄

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.04.15

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (04) : 816 -820+835. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.04.15

基因缺失型减毒猴痘病毒的构建及筛选

侯爽, 尚超, 蒋琦炜, 刘子睿, 朱羿龙, 韩继成, 赵仁双, 谢岚锦, 李一权, 刘艳, 李霄

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摘要

通过敲除猴痘病毒（monkeypox virus, MPXV）复制过程中非必需基因gp014,结合同源重组和外源标记筛选技术，构建gp014基因缺失的猴痘病毒株rMPXV-GP014^-。设计含gp014基因两段重组臂和EGFP筛选标记的穿梭质粒，并利用同源重组技术、荧光标记筛选技术，最终获得缺失gp014基因的重组猴痘病毒。通过荧光显微镜观察病毒筛选情况，用WB方法检测gp014表达情况，并通过PCR方法鉴定重组猴痘病毒及其遗传稳定性。结果显示，所构建的重组猴痘病毒rMPXV-GP014^-具有良好的遗传稳定性，且生长曲线结果显示缺失gp014基因后病毒毒力显著下降，但不影响病毒的正常复制。结果表明，试验成功构建了缺失gp014基因的重组猴痘病毒rMPXV-GP014^-,为后续病毒基因的研究奠定了基础。