2株牛冠状病毒流行株的遗传变异分析及mAb的制备

摘要

为了解牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)流行株的遗传变异情况，本研究从东北地区牛腹泻粪便样本中鉴定出2株BCoV流行株HEB2024和MDJ2021,并对其结构基因序列进行核苷酸同源性分析。结果显示，病毒S基因与已发表的29株参考毒株同源性为93.1%～99.6%,N基因的同源性在98.5%以上，M基因的同源性在99.3%以上，HE基因的同源性为97.5%～99%,E基因的同源性在99.6%以上。其中S基因变异程度较大，N、M、HE和E基因相对保守，可用于病原鉴定与临床诊断。遗传进化分析结果表明，HEB2024毒株与MDJ2021毒株S基因分别与中国流行毒株ON142317.1和ON142319.1处于同一分支，亲缘关系较近，推测HEB2024和MDJ2021为当前流行毒株的变异株。采用差速超速离心法纯化病毒，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞，有限稀释法进行亚克隆，通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株，获得2株能够稳定分泌BCoV抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1C5和2B2。特异性试验表明，2株单抗均能特异性识别BCoV,不与其他病毒发生交叉反应。间接免疫荧光试验结果显示，单抗与病毒具有良好的反应性。综上，本研究解析了BCoV的遗传变异，制备了BCoV的单抗，结果为防控该病奠定了基础。

关键词

牛冠状病毒 / 遗传进化分析 / mAb