蓝舌病病毒RAA-CRISPR/Cas13a可视化快速检测方法的建立

摘要

为建立蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)可视化快速检测方法，本研究根据BTV ns3基因的保守序列设计、合成和筛选出重组酶介导的等温核酸扩增(recombinase-assisted amplification, RAA)特异性引物和CRISPR/Cas13a特异性CRISPR RNA(Cas13a-specific CRISPR RNA,crRNA),利用层析式双抗体夹心试纸条，建立了1种BTV RAA-CRISPR/Cas13a可视化快速检测方法。结果显示，该方法特异性良好，与口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)、牛病毒性腹泻病病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)、绵羊痘病毒(sheep pox virus, SPV)和鹿流行性出血热病毒(epizootic hemorrhagic disease virus, EHDV)等病毒核酸无交叉反应；敏感性高，最低可检出4.94×10～4 copies/μL的BTV核酸；应用该方法及国家标准推荐的RT-qPCR方法对30个模拟样本进行平行检测，结果显示Kappa值为0.800,表明2种方法具有高度的一致性。本研究建立的基于BTV ns3基因RAA-CRISPR/Cas13a可视化、快速、特异、敏感的检测方法为该病毒检测提供了技术手段。

关键词

蓝舌病病毒 / RAA / CRISPR/Cas13a / ns3基因