牛疱疹病毒4型微滴数字PCR检测方法的建立与应用

摘要

基于4型牛疱疹病毒（bovine herpesvirus 4,BoHV-4）gB基因保守区，设计并筛选特异性引物与探针，通过优化反应体系与扩增程序，建立了检测BoHV-4的微滴式数字PCR,并应用该方法对临床样品进行了检测。结果显示，ddPCR法检测BoHV-4的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为58℃,最低检测下限为3.9 copies/μL,该方法线性范围良好（R²>0.99）;特异性强，除BoHV-4特异性扩增外，其他常见病毒特异性试验结果均为阴性；重复性高（Cv<5%）;对收集的208份牛源临床样品进行检测，结果与qPCR一致性良好。本研究建立的ddPCR方法为BoHV-4的早期感染监测、病毒载量分析及流行病学调查提供了可靠的技术支持。

关键词

牛疱疹病毒4型 / 微滴数字PCR / 定量检测