脂多糖对绵羊颗粒细胞焦亡的调控

摘要

脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)与卵巢早衰(prematureovarianfailure, POF)的研究已揭示其通过激活炎症通路、影响下丘脑G垂体G卵巢轴等机制发挥致病作用，但LPS对颗粒细胞(granulosacells, GCs)的具体调控机制仍有待解析。本研究选取≤2 mm直径的绵羊卵泡GCs为研究对象，添加LHR拮抗剂BAY-899,将其培养至F2代。利用RT-qPCR、ELISA、细胞免疫荧光、Western blot与流式细胞术探究了LPS对GCs炎性、焦亡及凋亡的作用。结果显示，在BAY-899作用下，GCs内特异性表达FSHR蛋白；生长曲线显示GCs具有正常的增殖活性。RT-qPCR和Western blot结果显示，与对照组相比，5 mg/L的LPS能显著促进IL-1β、IL-18与NLRP3的基因与蛋白表达(P<0.05)。细胞形态学结果显示，5 mg/L的LPS可诱导细胞发生明显肿胀，膜上具有孔洞结构，符合细胞焦亡形态学变化。细胞免疫荧光与Western blot结果表明，与对照组相比，LPS能显著促进焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD和NLRP3的表达(P<0.01);以上结果提示，5 mg/L LPS可能会造成GCs炎性损伤并伴随焦亡的发生；流式细胞术与Western blot结果发现，LPS不仅对GCs的早期与晚期凋亡率无显著性影响，且促凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl-2的比值也无明显差异。本研究证实，LPS可通过特异性激活炎症信号通路，诱导GCs发生焦亡，且这一过程并不影响细胞凋亡。该机制可能是导致卵泡闭锁及POF的关键原因。这一发现不仅进一步阐明了LPS造成卵巢损伤的作用机制，更为开展针对性的干预研究提供了理论支撑。

关键词

绵羊颗粒细胞 / 脂多糖 / 卵巢早衰 / 焦亡 / 凋亡