检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的数码编码磁珠检测方法的建立

摘要

通过合成筛选多肽序列，利用方阵法优化各反应条件，建立一种以猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV) N蛋白为靶标的检测PRRSV血清抗体的数码编码磁珠(barcoded magnetic beads, BMB)检测方法，并对此方法的敏感性、特异性和重复性进行鉴定。结果显示，该方法抗原最佳包被质量浓度为10 000个磁珠偶联6μg蛋白抗原，二抗最佳稀释度为1∶1 000,最佳血清稀释度为1∶50,血清最佳反应时间为22℃90 min,二抗最佳反应时间为22℃30 min;特异性试验结果显示，该方法与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪口蹄疫等4种疫病的阳性血清无交叉反应；敏感性试验结果显示，该方法在标准阳性血清质控品稀释为1∶1 600时，依然可以有效检出，比商品化ELISA试剂盒敏感性更高；批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有较好的重复性。结果表明，本试验建立了一种基于PRRSV N蛋白的数码编码磁珠检测方法，可用于临床PRRSV血清抗体检测，为监测PRRSV的流行情况提供高效、快速的诊断方法。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / 数码编码磁珠 / N蛋白

基金资助

北京市动物疫病预防控制中心综合保障(动物疫病综合防控)资助项目(11000024Y000002862075)