稳定表达PEDV S蛋白的细胞系的建立及其在抗体检测中的应用

张盼涛; 王勋; 刘晓恒; 刘伟; 朱巧艳; 张贺伟

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.06.04

中国兽医学报 ›› 2026, Vol. 46 ›› Issue (6) : 1218 -1225+1234. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2026.06.04

稳定表达PEDV S蛋白的细胞系的建立及其在抗体检测中的应用

张盼涛, 王勋, 刘晓恒, 刘伟, 朱巧艳, 张贺伟

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摘要

针对密码子优化的GⅡ基因型猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)S基因构建重组慢病毒表达质粒pLV-PEDV-S,转染293T细胞包装获得携带PEDV S基因的重组慢病毒，重组慢病毒感染IPEC-J2细胞后经嘌呤霉素加压筛选获得稳定表达PEDV S蛋白的IPEC-PEDV-S细胞系，并基于该细胞系建立改良型间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)方法用于临床猪血清PEDV抗体检测，与传统IFA检测结果符合率进行比较，评价该细胞系的临床应用价值。结果显示，本试验构建的细胞系稳定、高效地表达PEDV S蛋白，细胞增殖活力与亲本细胞无显著差异，且遗传稳定性良好；基于该细胞系建立的改良型IFA方法检测215份临床猪血清，检测结果与传统IFA方法阳性符合率98.58%,阴性符合率100%,总符合率达99.07%,且无需BSL-2环境和活病毒操作。结果表明，本试验构建的IPEC-PEDV-S稳转细胞系，不仅为PEDV临床诊断和疫苗免疫效果评价提供一种安全、高效、可靠的标准化的工具，也为冠状病毒入侵机制、宿主免疫应答等基础研究提供了新型细胞模型，为完善猪肠道传染病综合防控体系建设提供了技术支撑。