沙门菌与产气荚膜梭菌TaqMan双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要

针对沙门菌(Salmonella)fimY基因、产气荚膜梭菌(C.perfringens)plc基因的保守区利用Primer 5.0软件设计引物和探针，优化引物、探针浓度和反应程序，建立了沙门菌和产气荚膜梭菌TaqMan双重荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法对沙门菌和产气荚膜梭菌表现出高度特异性，并具有优异的重复性和稳定性，组内和组间变异系数均低于1%;该方法对沙门菌的最低检测限为2.2×10～1拷贝/μL,对产气荚膜梭菌的最低检测限为2.7×10～1拷贝/μL,检测灵敏度较常规PCR提高了100倍；应用建立的双重荧光定量PCR检测方法和地方标准PCR法分别检测174份临床样品，结果沙门菌阳性率为4.02%(7/174),产气荚膜梭菌阳性率为14.37%(25/174),混合感染率为1.72%(3/174),2种病原的符合率分别为99.43%、98.28%。结果表明，本试验建立的方法可适用于沙门菌和产气荚膜梭菌的临床检测、鉴别诊断和流行病学调查，对于保障动物健康、食品安全以及公共卫生安全具有重要意义。

关键词

沙门菌 / 产气荚膜梭菌 / TaqMan双重荧光定量PCR / fimY基因 / plc基因

基金资助

内蒙古自治区重点研发和成果转化计划资助项目(2023YFDZ0048)