CpxAR和H-NS负调控多重耐药鸡大肠杆菌IncF Ⅱ质粒接合转移的互作机制

摘要

以cpxR和/或hns的单、双基因缺失株（ΔcpxR、Δhns和ΔcpxRΔhns）为研究对象，分别采用质粒接合试验、β-半乳糖苷酶活性和电泳迁移率变动分析（electrophoretic mobility shift assay, EMSA）等方法进行研究。结果显示，IncF Ⅱ型质粒在双基因缺失株FΔcpxRΔhns的接合频率(1.24×10^-2)较FΔcpxR(1.06×10^-3)升高了7.39倍，但较FΔhns(9.16×10^-2)明显降低，表明cpxR与hns对IncF Ⅱ型质粒接合转移的调控呈拮抗作用。β-半乳糖苷酶活性检测发现，双基因缺失报告菌株FΔcpxRΔhns/P_Y/J/M中P_Y、P_J和P_M的β-半乳糖苷酶活性分别为6.97±0.18、5.21±0.10和2.59±0.12,均极显著高于FΔcpxR/P_Y/J/M的相应启动子，但极显著低于FΔhns/P_Y/J/M的相应启动子，说明cpxR和hns对启动子P_Y、P_J和P_M 活性的调控呈拮抗作用。EMSA结果显示，H-NS蛋白能明显阻滞含有CpxR box的启动子P_M、P_J和P_Y的DNA迁移，即H-NS能与含有CpxR box的P_M、P_J和P_Y的DNA结合，说明H-NS可通过竞争CpxR与TraY、TraJ和TraM的启动子区的结合位点而产生拮抗作用。结果表明，CpxAR和H-NS在负调控IncF Ⅱ型质粒接合转移时呈拮抗作用。

关键词

CpxAR / H-NS / IncF Ⅱ型质粒 / 接合 / 拮抗作用

基金资助

国家自然科学基金资助项目(32373074,31772800); 河南省科技攻关资助项目(252102111025)